圣克鲁斯生物技术公司

方式进行蛋白质印迹分析，用新鲜 PBS pH 7.4 洗涤 Vero 细胞，然后重新悬浮在裂解缓冲液中，该缓冲液是含有 1% TritonX – 100 和 1X 蛋白酶抑制剂的 PBS pH 7.4。使用Ready PrepTM蛋白提取试剂盒进行蛋白提取。将约 20 µg 总蛋白裂解物溶解在含有 4% SDS、10% 2-巯基乙醇、20% 甘油、0.004% 溴酚蓝和 0.125 M Tris HCl 的 2x Laemmli 样品


缓冲液中。检查pH值并使其达到6.8。将每种混合国家电子邮件列表物在 95°C 下煮沸 5 分钟，以确保在聚丙烯酰胺凝胶电泳上样之前蛋白质变性。根据标准方案，通过电印迹将蛋白质转移到 PVDF 膜上。在含有 0.1% Tween 20 和 3% 牛血清白蛋白的 PBS pH 7.4 中应用封闭剂 1 小时，并将印迹与小鼠抗 RVFV N (R3-ID8;1:2,000) (BEIResources, NIH, Manassas) 偶联，VA，美


国）和抗β-肌动蛋白（1:200；，达拉斯，德克萨斯州，美国）单克隆抗体过夜，β-肌动蛋白用作上样对照。然后，清洗膜并用山羊抗小鼠 HRP 偶联二抗 (1:5,000) (Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA) 孵育 1 小时，并使用增强化学发光 (ECL) 检测来检测特异性反应性系统（GE Healthcare，英国白金