统生成的目标基因的阈值

抑制程度。病毒感染24小时后从细胞培养物中收获病毒RNA；并通过 Direct-zol RNA Miniprep Plus 试剂盒（ZYMO RESEARCH CORP., USA）根据制造商说明方案从上清液中提取。RNA 洗脱在体积为 50 µL 的洗脱缓冲液中进行，并储存在 -80°C 直至进一步使用。SuperScript IV 一步 RT-PCR 试剂盒（Thermo Fisher Scientific，沃尔瑟姆，马萨诸塞


州）方案采用 SYBR Green 染料以及正向了。通过Primer3程序在国家电子邮件列表线软件设计扩增RVFV N蛋白的引物，扩增保守N蛋白的150个核苷酸。病毒载量的相对量用Ct值表示。相对定量（RQ）（2-ΔΔCT）是一种重要的方法，用于计算基因表达的相对水平，并直接使用PCR系循环并标准化为相应的β-肌动蛋白管家基因。RQ由PCR仪器软件包自动生成


随后的反应条件为55℃10min逆转录酶激活，95℃2min逆转录酶失活，随后40次95℃10s，55℃15s，72℃ C 30 秒。使用 Applied Biosystem（Step One Applied Biosystem，福斯特城，美国）进行最后的延伸步骤，在 72°C 下进行 5 分钟。 通过蛋白质印迹测定 N 蛋白表达水平 为了确定转染 48 小时并以 MOI = 2 感染 RVFV 后 siRNA 对 RVFV 靶向 N 蛋白表达的影响，按如下